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2025-08-09 08:10:08  閱讀 46 次 評(píng)論 0 條

腺相關(guān)病毒的生產(chǎn),純化和保存

短期保存:將腺病毒置于4℃條件下保存。長(zhǎng)期保存:將腺病毒置于80℃條件下保存,并避免反復(fù)凍融以降低病毒滴度。安全使用與注意事項(xiàng):在進(jìn)行腺病毒包裝和操作時(shí),應(yīng)穿戴適當(dāng)?shù)姆雷o(hù)裝備。使用后應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)器材進(jìn)行消毒和滅菌處理,確保實(shí)驗(yàn)環(huán)境安全。應(yīng)用:腺病毒載體在科研中有廣泛應(yīng)用,包括基因傳遞、細(xì)胞研究、動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)等。

重組腺相關(guān)病毒(rAAV)的生產(chǎn)主要基于三質(zhì)粒系統(tǒng)(核心質(zhì)粒、血清型質(zhì)粒、輔助質(zhì)粒)在HEK293T細(xì)胞中的共轉(zhuǎn)染。此過(guò)程在輔助質(zhì)粒的幫助下,有效將帶有內(nèi)部重復(fù)末端(ITR)的目的DNA片段包裝到rAAV病毒顆粒中,產(chǎn)生結(jié)構(gòu)蛋白Cap和功能蛋白R(shí)ep。

病毒大量擴(kuò)增與純化 - 細(xì)胞鋪板:將HEK293細(xì)胞鋪至30-40個(gè)10cm dish,感染病毒,收集細(xì)胞裂解物,離心,收集上清,加入病毒沉淀液,冰上放置沉淀病毒,離心收集病毒懸浮液,透析后于-80℃保存。

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