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多肽合成如何保護多肽活性？

添加糖類、多元醇、明膠、氨基酸和鹽類等物質(zhì)也能提高穩(wěn)定性。它們在低濃度下能吸引水分，保護蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，尤其在凍干過程中，這些物質(zhì)能與多肽形成氫鍵，固定天然構(gòu)象，同時提高凍干產(chǎn)品玻璃化溫度，減少聚集現(xiàn)象，如SDS、Tween、Pluronic等表面活性劑也有助于防止多肽的表面吸附和沉淀。

要成功合成具有特定的氨基酸順序的多肽，需要對暫不參與形成酰胺鍵的氨基和羧基加以保護，同時對氨基酸側(cè)鏈上的活性基因也要保護，反應完成后再將保護基因除去。同液相合成一樣，固相合成中多采用烷氧羰基類型作為α氨基的保護基，因為這樣不易發(fā)生消旋。

Asn和Gln的酰胺鍵一般不保護，但合成大肽時可能產(chǎn)生副反應，可使用9-咕噸基等保護，以提高溶解度并避免問題。 His的消旋化問題嚴重，Boc基團是理想選擇，但也存在穩(wěn)定性問題，咪唑環(huán)的π-N保護則可采用Bom和Bum，Bom需氫解或酸脫保護，Bum有發(fā)展前途但溶解度較低。

在多肽固相合成過程中，為了得到特定氨基酸順序的多肽，關(guān)鍵步驟包括氨基、羧基和側(cè)鏈的保護及最終的脫除。保護氨基通常采用烷氧羰基，如叔丁氧羰基（BOC），它在酸性條件下容易脫除。Fmoc（芴甲氧羰基）也是一種常用保護基，對酸穩(wěn)定，可用哌啶-CH2CL2或DMF脫除，如今Fmoc合成法得到廣泛應用。

溫度和金屬離子影響。最后，變性、吸附、聚集或沉淀也是問題，變性影響三級和二級結(jié)構(gòu)，易引發(fā)化學反應；蛋白質(zhì)表面吸附可能導致活性損失，如riL-2在存儲和使用過程中的表現(xiàn)。通過細致研究這些因素，科學家能夠設計出更穩(wěn)定的多肽制劑，如利用CD、DSC等工具篩選合適的穩(wěn)定劑，以提高制劑的實用性和耐久性。

氨基酸保護是關(guān)鍵，常用的有Cys、Lys、Asp的保護基，如Trt、Acm、Mob等，以及對應的脫除策略。多肽合成中，羧基活化是主要反應，如DCC、DIC、EDC等，其中EDC需配合抑制劑以減少副反應。固相合成常用樹脂如PAM、MBHA，樹脂結(jié)構(gòu)決定反應條件和方法，如HF切割PAM，TFA切割Wang樹脂。